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線粒體檸檬酸測試盒100管/96樣
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線粒體檸檬酸測試盒100管/96樣公司正在出售的產(chǎn)品:0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human E-selectin 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Lamina-associated polypeptide 2, isoform alpha 3.12-200 U/L ELISA Kit for Human Complement C3
  線粒體檸檬酸測試盒100管/96樣的詳細資料:

測定步驟:

1、 酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱

線粒體檸檬酸測試盒100管/96樣

規(guī)格

100管/96樣

檢測方法

微量法

貨號

BJ-01S9772

11.png 

 

 

商品介紹:

測定意義:

CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強度的主要指標之一。

配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進行狀況。

測定原理:

CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。

自備儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

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產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 線粒體檸檬酸 測試盒 100管/96樣
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